Диагностика хламидиоза. Материал для врачей.

0
749
Нужно отметить, что хламидии не относятся к нормальной микрофлоре человека; их обнаружение указывает на наличие инфекционного процесса, ими обусловленного. В связи с этим лабораторная диагностика хламидиоза имеет решающее значение (определение хламидий в пораженных клетках, выделение возбудителя в культурах клеток, обнаружение хламидийных антител; данные молекулярно-биологических методов диагностики).

Прежде чем идти далее, предлагаю вам ознакомиться со следующими статьями:

  1. Симптомы и лечение хламидиоза.
  2. Хламидиоз у мужчин.
  3. Хламидиоз у женщин.

Лабораторные методы диагностики хламидиоза:

1) Выявление морфологических структур хламидий в исследуемом материале при окраске по Романовскому-Гимза (непосредственно в пораженных клетках). Для подтверждения этиологического диагноза необходимо обнаружить от 5 до 10 типичных цитоплазматических включений хламидий.
2) Высокой информативностью обладают молекулярно-биологические методы. В диагностике хламидиоза используют ПЦР, ЛЦР, транскрипционную амплификацию (основана на специфической нуклеиновой последовательности, присущей только ДНК или РНК хламидий) и метод амплификации со смещением нитей ДНК.
3) Выделение хламидий в культурах клеток (метод является одним из доказательных, но и трудоемким). После выделения культуры ее окрашивают по Романовскому-Гимза; оценивают в световом микроскопе при масляной иммерсии — на наличие цитоплазматических включений. Элементарные тельца хламидий красятся в красный цвет, а ретикулярные — в синий. При окрашивании препаратов флюоресцентными антителами и исследовании методом ПИФ, их смотрят под люминесцентным микроскопом. Как отмечено, преимущесвом метода является его специфичность (100%) и достаточно высокая чувствительность (75%). Однако, широкому применению метода препятствует его сложность, дороговизна, возможность получения результатов не ранее 72 ч, а также большой риск заражения персонала.
4) Выявление антигенов хламидий в исследуемом материале методом флюоресцирующих антител. Для диагностики хламидиоза используют МФА — в прямой и непрямой модификациях:
  • Прямой иммунофлюоресцентный метод (ПИФ заключается в соединении меченых флюорохромом антител со специфическим антигеном и наблюдении реакции при люминесцентной микроскопии); при этом хламидии могут оказаться в пораженных клетках в виде характерных цитоплазматических включений, окрашенных в ярко-зеленый цвет; или внеклеточно — в виде отдельных ярко-зеленых элементарных или ретикулярных телец. Результат считается позитивным, если в препарате внеклеточно определяется не менее 10 ярко-зеленых элементарных (в виде точки) или ретикулярных (в виде точки или овала) телец хламидий, которые четко выделяются на красном, желтом фоне контрастно окрашенных клеток. Выявление внутри клетки одного типичного цитоплазматического включения хламидий (изумрудного цвета) достаточно для положительного результата. Преимуществами метода является скорость при высокой чувствительности (85%), определение возбудителя в препарате;
  • Непрямой иммунофлюорерцентный метод (НИФ заключается в соединении меченых флюоресцином антител с комплексом специфического антигена с антихламидийными антителами). При этом антигены хламидий оказываются на оранжевом фоне цитоплазмы внутри эпителиальных клеток в виде цитоплазматических включений, флюоресцирующих ярко-зеленым или желтовато-зеленым цветом. Позитивным является результат при наличии 5 или больше цитоплаз-матических включений.
5) Выявление антигенов хламидий методом иммуноферментного анализа (метод основан на взаимодействии моноклональных хламидийных антител, адсорбированных на поверхности лунок полистироловых планшетов, с хламидийным антигеном, который находится в исследуемых образцах, и образовании иммунных комплексов). Позитивными считаются образцы с расцветкой субстратного раствора, идентичного позитивным контрольным образцам. Чувствительность ИФА для выявления хламидий колеблется в пределах 50-70% (при уретритах); при бессимптомном заболевании у мужчин — снижается до 44-50%. При обследовании женщин эти показатели составляют 88-100%; при бессимптомных заболеваниях — 40% (что ограничивает использование ИФА при данной форме хламидиоза).
6) Обнаружение хламидийных антител иммунологическими методами;
а) Реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Материалом для исследования является сыворотка крови больного, секреты половых желез и т.п. Оценку результатов проводят по степени специфической флюоресценции комплекса антигена (элементарных и ретикулярных телец) с антителом. Интенсивность свечения оценивают:
  • (4+) — очень яркая зеленая флюоресценция ЭТ и РТ хламидий;
  • (3+) — четкая ярко-зеленая флюоресценция ЭТ и РТ хламидий;
  • (2+) — удовлетворительная флюоресценция ЭТ и РТ хламидий;
  • (+) — слабая зеленая флюоресценция ЭТ и РТ хламидий.
Титром хламидийных антител в исследуемых сыворотках считают то наибольшее разведение, при котором наблюдается четкая ярко-зеленая флюоресценция, связанная с хорошо различимыми ЭТ и РТ хламидий не менее, чем на 2+. При негативных результатах флюоресценция отсутствует. Результат анализа считают позитивным при высоком титре антител (1:64 и выше) или при нарастании титра антител в парных сыворотках (в 3-4 раза от начального уровня), т.к. однократное выявление хламидийных антител может быть связано не только с текущим заболеванием, но и с перенесенной хламидийной инфекцией. При лечении титры антител могут снижаться;
б) выявление хламидийных антител иммуноферментным методом (ИФА — основан на взаимодействии хламидийного антигена, адсорбированного на поверхности лунок полистироловых планшетов с иммуноглобулинами (IgM, IgG) в сыворотках крови человека. Материал для исследования — сыворотки крови как свежеполученные, так и сохраненные при t+2-10°C (на протяжении 48 ч) или при -20°С (на протяжении 2 нед). Оценку результатов ИФА осуществляют с помощью иммуноферментного анализатора по величине ОП растворов в лунках планшета при длине волны 492 нм. При этом сравнивают интенсивность цвета субстратного раствора в лунках с контролем.
Интенсивность цвета изменяется — от светло-желтого к бесцветному в лунках (с отрицательным контролем) и к оранжево-коричневому в лунках с политивными контрольными образцами. Позитивными считаются образцы с расцветкой субстратного раствора, идентичного позитивным контрольным образцам. Позитивными считаются образцы, которые обнаружили ОП, втрое выше ОП отрицательного контроля;
в) реакция связывания комплемента (РСК — выявляет антитела к родоспецифическому антигену хламидий). РСК мало подходит для диагностики заболеваний глаз и генитальной инфекции. Диагноз считают позитивным только при титрах антител 1:64 и выше (или при выраженной сероконверсии);
г) реакция непрямой гемаглютинации (РИГА — используется для диагностики зоонозных хла- мидиозов и первичного серологического скрининга антропонозных хламидиозов).

Экспресс-методы диагностики хламидиоза:

а) иммунофильтрация (специфическая иммунологическая реакция реализуется на фильтре сложной структуры, одновременно выполняющем функцию иммуносорбента).
б) иммунохроматография (реализуется в виде диагностических полосок, а также кассет, мембран; при положительном результате в определенном месте тестполоски появляется окрашенная зона: метод характеризуется простотой выполнения, однако обычно дает качественный, а не количественный ответ). Экспресс- методы предназначены для предварительного обследования; их можно использовать в небольших лабораториях; их отличает дешевизна, быстрота исследования; чувствительность их не превышает 65%, а специфичность близка к 100%.
PS: посмотрите как выглядят хламидии под микроскопом.

Статья диагностика хламидиоза.

НЕТ КОММЕНТАРИЕВ

ОСТАВЬТЕ ОТВЕТ